1.Valg af den rigtige cellelinje
Når du vælger den passende cellelinje til dit eksperiment, skal du overveje følgende kriterier:
a. Arter: Ikke-menneskelige og ikke-primate cellelinjer har normalt færre biosikkerhedsrestriktioner, men i sidste ende vil dit eksperiment afgøre, om der skal bruges en kultur af en bestemt art.
b.Features: Hvad er formålet med dit eksperiment?For eksempel kan cellelinjer afledt af lever og nyre være mere egnede til toksicitetstestning.
c. Begrænset eller kontinuerlig: Selvom valg fra en begrænset cellelinje kan give dig flere muligheder for at udtrykke den korrekte funktion, er kontinuerlige cellelinjer generelt nemmere at klone og vedligeholde.
d. Normal eller transformeret: Transformerede cellelinjer har normalt en højere væksthastighed og højere podningseffektivitet, er kontinuerlige og kræver mindre serum i dyrkningsmediet, men deres fænotype har undergået permanente ændringer gennem genetisk transformation.
e.Vækstbetingelser og karakteristika: Hvad er dine krav til væksthastighed, mætningstæthed, kloningseffektivitet og suspensionsvækstevne?For at udtrykke rekombinante proteiner i høje udbytter kan det for eksempel være nødvendigt at vælge cellelinjer, der har hurtige væksthastigheder og evnen til at vokse i suspension.
f.Andre kriterier: Hvis du bruger en begrænset cellelinje, er der så nok lager til rådighed?Er cellelinjen fuldt karakteriseret, eller skal du selv verificere den?Hvis du bruger en unormal cellelinje, er der så en tilsvarende normal cellelinje, der kan bruges som kontrol?Er cellelinjen stabil?Hvis ikke, hvor let er det så at klone det og generere nok frosset lager til dit eksperiment?
2.Opnå cellelinjer
Du kan bygge din egen kultur fra primære celler, eller du kan vælge at købe etablerede cellekulturer fra kommercielle eller non-profit leverandører (dvs. cellebanker).Velrenommerede leverandører leverer højkvalitets cellelinjer, der er blevet omhyggeligt testet for integritet og sikrer, at kulturen er fri for forurenende stoffer.Vi anbefaler ikke at låne kulturer fra andre laboratorier, fordi de har en høj risiko for cellekulturkontamination.Uanset kilden skal du sørge for, at alle nye cellelinjer er blevet testet for mycoplasma-kontamination, før du begynder at bruge det.
Indlægstid: 01-02-2023